磁珠和卵白/抗体记号手艺是一项焦灼的生物手艺技巧。磁珠是含磁性微粒的球体，其名义的官能团可与卵白或抗体通过化学或物理表率连气儿，完了记号。在应用方面，等闲用于生物医学考虑中的卵白质纯化、细胞分选、免疫千里淀，以及临床会诊的免疫检测等范畴。该手艺具有显赫上风，它能完了高效分离，哄骗磁场可快速从复杂搀杂物均分离出探究物，从简时间；特异性高，精确拿获探究分子，减少侵扰；且操作方便，对履行成就和东谈主员手艺要求相对较低，为科研与临床会诊提供了有劲维持。

记号表率

羧基磁珠记号卵白为例

1. 履行材料

羧基磁珠：选拔粒径为1μm的羧基磁珠（浓度为10mg/mL），准备100μL。

待记号卵白：探究卵白纯度大于90%，浓度为2mg/mL，凭证磁珠与卵白的集中比例（1:2-1:5），准备 300μL。

缓冲液及试剂：

活化缓冲液：0.1M MES 缓冲液（pH 6.0），准备500μL。

偶联缓冲液：PBS 缓冲液（pH 7.4），准备2mL。

伸开剩余80%

闭塞缓冲液：1% BSA的PBS缓冲液，准备1mL。

洗涤缓冲液：含0.05% Tween-20的PBS缓冲液，准备5mL。

活化试剂：EDC和 NHS，EDC 浓度为 50μg/mL，NHS浓度为25μg/mL，凭证磁珠体积探究用量（100μL磁珠差异对应5μgEDC和2.5μgNHS）。

2. 履行面容

2.1 磁珠活化

将100μL的羧基磁珠悬液改换至离心管中，置于磁力架上，待磁珠弥散吸附到管壁后，注意吸去上清液。

加入500μL的 0.1M MES缓冲液（pH 6.0），涡旋混匀使磁珠重悬。

差异加入5μgEDC 和2.5μgNHS，轻轻涡旋混匀后，室温孵育30分钟，时间每隔5-10分钟轻轻倒置混匀一次，使磁珠充分活化。

2.2 卵白记号

活化狂妄后，将离心管置于磁力架上，吸去上清液。

加入500μL的PBS 缓冲液（pH 7.4），洗涤磁珠3次，每次洗涤时涡旋混匀，磁吸后吸去上清液，以去除未反馈的活化试剂。

加入300μL浓度为2mg/mL的待记号卵白溶液，用PBS缓冲液补皆至500μL，轻轻涡旋混匀，使卵白与磁珠充分搏斗，然后在4℃下动荡孵育2小时，确保记号反馈充分进行。

2.3 闭塞未反馈位点

记号反馈完成后，将离心管置于磁力架上，集会磁珠，吸去上清液。

加入1mL的1% BSA的PBS 缓冲液，涡旋混匀，室温孵育1小时，闭塞磁珠名义未反馈的羧基位点，减少非特异性吸附。

2.4 洗涤去除未集中的卵白

闭塞狂妄后，将离心管置于磁力架上，弃去上清液。

加入1mL的含0.05% Tween-20的PBS 缓冲液，涡旋混匀，使磁珠充分悬浮，然后磁吸分离，吸去上清液。叠加洗涤面容5次，确保透顶去除未集中的卵白和其他杂质。

2.5 保存记号后的磁珠

将记号好的磁珠用500μL含0.1% BSA和0.02% NaN3的PBS缓冲液重悬，使其浓度为2mg/mL（磁珠浓度），并存放在4℃雪柜中备用，幸免反复冻融。

磁珠记号卵白/抗体时，影响集中成果的成分有哪些？

1. 磁珠成分：磁珠的粒径大小与比名义积关联，粒径小比名义积大，表面上集中位点更多，但过小可能不易操作和分离。其名义官能团的种类和数目至关焦灼，举例羧基、氨基、环氧基等，官能团数目多、活性高，与卵白或抗体的反馈契机就大。磁珠的散播性也拦阻薄情，散播均匀能让卵白或抗体充分搏斗，若发生团员则会减少有用集中位点。

2. 卵白/抗体成分：纯度高、浓度合适的卵白或抗体更易集中，浓渡过高可能产生空间位阻或非特异性吸附，过低则碰撞集中几率小。卵白或抗体的结构无缺性影响活性基团的泄露进程，结构舒展、活性基团泄露多，与磁珠的反馈就更告成。

3. 反馈条款成分：包括缓冲液的种类、pH 值、离子强度等。适应的 pH 值能保证磁珠和卵白/抗体的电荷情状利于集中，离子强渡过高可能屏蔽电荷裁减集中力。反馈温度和时间也有影响，温度适应可加速反馈速度，但过高易导致卵白或抗体变性，时间过短反馈不充分，过长可能增多杂质吸附。

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